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酸度计在检测牛奶中残留青霉素酶含量的应用
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1实验部分
  
  青霉素通过青霉素酶作用,可以生成青霉素噻唑酸,其反应过程如下:

  
  该酸可以电离产生H ,是一种强酸,所以酶催化反应的速率可以通过酸度的变化来表示,这样根据米恰利-门顿反应动力学方程:

  
  酵催化反应速率与酶和底物有关,当底物的浓度[S]很大时,反应速率与[S]无关,而只与酶的总浓度成正比,这样就可以通过酸度的变化来测定酶的浓度.为了找出最佳测试条件,我们选择了酶催化适宜温度,底物浓度受缓冲容量。其中,空白为不加酶的PBS,这样可以对实验过程中的其他一些干扰因素进行相关扣除,以PBS为溶剂配置不同浓度的青霉素酶溶液,做前期定性实验,然后用脱脂奶粉配成牛奶溶液,经过等效巴氏消毒后,做青霉素分解实验.(以下数据均扣除了空白)。
  
  2结果分析与讨论
  
  2.1选取缓冲容量
  
  这里选择一定缓冲量的溶液来模拟,是考虑到了牛奶本身具有一定缓冲能力。最终选取0.025mol/L,PH7.0的PBS溶液。
  
  2.2最适温度的选择
  
  比较不同温度对酶活的影响,最终选择25℃的最适温度,来进行下一步的实验工作。
  
  2.3底物的藏度溶选择
  
  用PBS配制维度为10、15,20、25、30、35mg/ml的青霉素溶液,分别加入50IU/ml的青霉素酶,反应30min后,得到变化曲线。
  
  根据米恰利-门顿原理,当底物浓度足够大时,酶的催化作用速率与底物浓度无关。可以看出,随着青霉素底物的浓度的增大,当青霉素酶的浓度一定时,相应的酶催化的反应速率也随之增加,而当青霉素的浓度达到20mg/ml时,反应速率基本达到最大值。为得到稳定效果,最终选择青霉素底物的浓度为25mg/m1。
  
  2.4工作曲线的测定
  
  可以看出,在PBS配制的青霉素溶液中,加入青霉素酶,pH值随时间增加而下降。由?pH=pH30min-pH0min得到图1,从图1看出:对于酶催化的速率来说,与酶的总浓度成比例关系,当增加青霉素酶浓度后,青霉素分解的反应速率加快。在10-5050IU/ml范围之间,呈线性关系。随着青霉素酶浓度的增加,最低检出限为10IU/ml。

  
  从用牛奶配制的青霉素溶液,加入不同浓度的青霉素酶反应过程的pH值中可以看出,对于溶剂为牛奶的情况来说,PBS相似的变化特征也相应呈现出来:只要增加青霉素酶浓度,青霉素分解的反应速率加快,其中,?pH=pH30min-pH0min。图2为在不同浓度下青霉素酶作用下牛奶溶液的?pH值,从图中可以看出,当不断增大青霉素酶浓度以后,同样的,增大?pH也成为必然,这样也呈现一定的线性关系,其中,8IU/ml为最低检出限。

  3结论
  
  当底物的浓度很大时,反应速率与底物无关,本实验选用25mg/ml浓度青霉素作为底物。当随着青霉素酶浓度的增加,分解青霉素的速度加快,pH变化增大。在标准奶样的检测中,最低检出限达到8IU/ml,下一步增加取点密度,绘制检测工作曲线,用于实际奶样的检测。

非常明确地讲,“十二五”期间,“十一五”的减排内容仍会继续:二氧化硫和化学需氧量(COD,衡量水中有机物质含量多少的指标)是两个约束性指标。我们看到,美国从20世纪80年代末90年代初到现在,二氧化硫排放量从2500万吨/年降低到了800万吨/年,因此,无论“十二五”我国在这两项指标的减排力度上下降10%还是15%,都有足够的削减空间。同时,我国的江河湖泊水体富氧化现象严重,太湖、滇池等污染严重,

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